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UE Embryologie et Développement – L2 BIO2010L – Université Lyon1 CC terminal ju

UE Embryologie et Développement – L2 BIO2010L – Université Lyon1 CC terminal juin 2015 1h30 min – documents, appareils électroniques interdits Partie I- Sujet de synthèse (50 min-12 pts) Pendant l’embryogenèse, un certain nombre de facteurs sont distribués en gradient de concentration et contrôlent des étapes cruciales du développement Vous présenterez les deux grands types de facteurs distribués en gradient vus en cours. Vous ferez donc deux parties distinctes. Pour chaque partie, on attend des détails sur: - leur nature moléculaire - le contexte dans lequel il intervient - leur mode d'action - leur rôle au cours du développement Vous décrirez des exemples pertinents bien détaillés dans chaque partie Vous vous appuierez sur des expériences vues en cours pour étayer vos propos. Consignes : Adoptez un style simple, concis, illustré par des schémas bien annotés. On attend de vous que vous évoquiez un certain nombre de termes-clés. Soulignez-les ! 1 enfant sur 1000 naît avec une anencéphalie ou une « spina bifida ». Il s’agit de malformations congénitales consécutives à un défaut de fermeture du tube neural au niveau du cerveau ou de la moelle épinière. Des études ont montré que le risque d’apparition de ces malformations est fortement augmenté en cas de carence en folate (aussi appelé « vitamine B9 »). Aussi, une supplémentation en folate par voie alimentaire est fortement préconisée pour les femmes dans les semaines qui entourent la conception. On cherche à mieux comprendre le mode d’action du folate pendant l’embryogenèse. Chez la souris sauvage, le tube neural se ferme entre le 8e (E8) et 9e (E9) jour de développement. Il est fermé à E9. Des chercheurs ont mis en culture des embryons de souris à E8,5 (tube neural ouvert) en présence ou absence de plusieurs concentrations de folate (FA). Puis ils ont fixé les embryons à E9,5 et marqué les ARNm Alx3 (fig.1). Ils ont parallèlement effectué des RT-PCR à partir de ces mêmes conditions (fig.2). Partie II- Analyse de documents (40 min – 8 pts) 1/4 Qst1: Quelle technique a permis d’obtenir les marquages de la fig.1? Quel est son principe (5 lignes max)? Qst2: Analyser ces marquages (fig.1) et les résultats de RT-PCR (fig.2) dans les différentes conditions de concentrations de folate [FA] et conclure (6 lignes max) Qst3: Analyser la morphologie des embryons dans les deux conditions de [FA] (fig.1) et conclure. (4 lignes max) Figure 1: embryons de souris in toto à E9,5 ARNm Alx3 [FA] 1µM [FA] 0µM vue de face vue latérale vue dorsale FA(µM) -‐ 0,1 1 Alx3 AcBn Figure 2: produits de RT-PCR sur Alx3 et Actin à partir d’embryons c u l t i v é s d a n s d i f f é r e n t e s concentration de FA Le gène Alx3 code une protéine à homéodomaine. Un knock-out du gène Alx3 a été obtenu. Des embryons de souris Alx3-/- et +/+ à E9,5 ont été prélévés sur des mères gestantes ayant une alimentation normale contenant du folate et fixés (fig.3 et 4) Qst4: analyser les figures 3 et 4 et conclure (5 lignes max) vue de face Figure 3: embryons Alx3-/- et +/+ in toto vue dorsale Alx3-/- Alx3+/+ tél tél tél tél més més més més Alx3-/- Alx3+/+ Figure 4: coupes histologiques d’embryons Alx3+/+ ou Alx3-/- à E9,5; le niveau de coupe est indiqué sur le schéma (més= m é s e n c é p h a l e , t é l = t é l e n c é p h a l e , m=mésenchyme, ne= neuroépithelium) més més Le gène Lrp2 code pour un récepteur membranaire capable d’interagir avec plusieurs types de ligands extracellulaires. La figure 5 montre des embryons de souris Lrp2-/- ou sauvages prélevés à des mères gestantes ayant une alimentation normale contenant du folate et directement fixés à E9,5. Qst5: conclure directement. Figure 5: embryons in toto vue de face vue latérale Les ARNm Alx3 ont été analysés chez ces mêmes embryons Lrp2+/+ et Lrp2-/- (fig.6) niveau d’ARNm Alx3 Figure 6: ARNm Alx3 chez des embryons in toto Lrp2-/- et +/+. (les pointillés soulignent le contour de l’embryon). L’histogramme montre la quantification en RT-PCR des ARNm Alx3. ** indique une p value inférieure à 0,01 vue latérale D V Qst6: analyser la figure 6 et conclure Figure 7: coupes transversales d’embryons de souris Lrp2+/+ et Lrp2-/- à E8,5 au niveau de la plaque neurale: en vert immunomarquage de Lrp2, en bleu coloration des noyaux. Les images de droite montrent les régions encadrées à plus fort grossissement (les pointillés indiquent la bordure de la plaque neurale). folate Lrp2+/+ Lrp2-/- Lrp2+/+ Lrp2-/- anti-Lrp2 anti-Lrp2 / noyaux Figure 8: coupes transversales d’embryons de souris Lrp2+/+ et Lrp2-/- à E8,5 au niveau de la plaque neurale: en rouge, folate couplé à un fluorochrome rouge 3/4 Des immunomarquages anti-Lrp2 ont été effectués sur des embryons à E8,5 au niveau de la plaque neurale. Qst7: Où est localisé Lrp2 (fig. 7)? (2 lignes max) Des embryons Lrp2+/+ ou -/- ont été prélévés à des mères gestantes à E8,5, puis incubés entiers pendant 1h dans un milieu de culture contenant du folate couplé à un fluorophore rouge. Les embryons sont ensuite rincés, fixés et coupés. La figure 8 montre la fluorescence rouge présente sur des coupes transversales au niveau de la plaque neurale. Qst 8: Analysez la figure 8 et conclure sur le rôle de Lrp2. (5 lignes max) Qst 9: Faites un schéma fonctionnel présentant par quelle voie le folate agit sur le développement du tube neural et montrant la place des différents partenaires vus plus haut? Expliquez en 5 lignes ce mécanisme. 4/4 uploads/Management/ ct-juin-2015 1 .pdf