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Bouillon nitrate1 ère STL Fiche technique n Intérêt LE BOUILLON NITRATE Recherche de la nitrate réductase Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d ? une enzyme du métabolisme énergétique la nitrate réductase Composition Bouillon nutrit

ère STL Fiche technique n Intérêt LE BOUILLON NITRATE Recherche de la nitrate réductase Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d ? une enzyme du métabolisme énergétique la nitrate réductase Composition Bouillon nutritif additionné de nitrate de sodium Principe Dans la respiration nitrate NO - est utilisé comme accepteur ?nal d'électrons provenant de l'oxydation d'un composé organique ex glucose NO - est réduit par la nitrate réductase soit en nitrite NO - Glucose produits oxydés n e- NO - H e- NO - H O nitrate réductase stade nitrites soit en diazote N Glucose produits oxydés n e- NO - H e- N H O nitrate réductase stade diazote La technique consiste donc - à mettre en évidence dans un premier temps la présence éventuelle de nitrites gr? ce au réactif de Griess nitrite I acide sulfanilique et nitrite II ??-naphtylamine qui forme un complexe rouge foncé avec les nitrites Remarque en présence d ? autres composés azotés N le réactif conserve sa couleur jaune à rechercher en absence de nitrite la disparition des nitrates en ajoutant du zinc qui catalyse la réduction des nitrates en nitrites alors mis en évidence par le réactif de Griess C ère STL ? Fiche technique n Technique d ? ensemencement Ensemencer le bouillon nitraté avec quelques gouttes de suspension bactérienne Incuber h à C Lecture Après heures d ? incubation à C Véri ?er que le bouillon est trouble présence de culture Ajouter le réactif de Griess Nitrite I Nitrite II Observer la couleur du milieu Ajouter du zinc selon le résultat de l ? étape précédente et interpréter la couleur du milieu Nitrite I Nitrite II réactif de Griess Observation coloration rouge Interprétation présence de NO - issus de la réduction des NO - Conclusion NITRATE REDUCTASE stade NO - Ajout de poudre de Zn Observation coloration rouge Interprétation le Zn a réduit NO - encore présents en NO - qui sont révélés par les réactifs Pas de réduction de NO - en N Conclusion NITRATE REDUCTASE - Pas de coloration Observation pas de coloration rouge Interprétation pas de présence de NO issus des NO - Les NO - été réduits en N par la bactérie Conclusion NITRATE REDUCTASE stade N C