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Fiche technique culture helicobacter pylori

Culture de Helicobacter pylori à partir des biopsies gastriques Les conditions de transport des biopsies gastriques sont strictes pour pouvoir rechercher H pylori par culture Les échantillons doivent être adressés rapidement au laboratoire en utilisant un milieu de transport spéci ?que à C par exemple milieu Portagerm Pylori bioMérieux Au-delà de h de transport il est préférable décongeler les biopsies dans un tube sec et les acheminer en carboglace ou en azote liquide I Ensemencement des biopsies gastriques Matériels nécessaires - milieux de culture gélosés Pylo CNRCH ? contacter le CNR pour composition et préparation ET OU un milieu de culture Pylori commercial bioMérieux réf Ces milieux sont à sortir du réfrigérateur min avant utilisation - du bouillon nutritif par exemple bouillon Brucella ou BHI - pilons en plastique stériles VWR réf - ou LABCON réf - - et tubes ml stériles - Oeses stériles - Pastettes stériles I Broyage Ajouter à l ? aide d ? une pastette quelques gouttes de bouillon nutritif dans le tube stérile de ml Prélever le ou les fragments de biopsie avec une oese ou une pastette stérile et les déposer dans le microtube Broyer la biopsie à l ? aide du pilon pendant sec maximum La suspension doit être homogène Compléter la suspension avec du bouillon nutritif jusqu ? à un volume d ? environ ml I Examen direct Un examen direct peut être e ?ectué directement sur les biopsies gastriques Pour cela déposer un des fragments de biopsie ou une goutte du broyat sur une lame porte objet correctement annotée A l ? aide d ? une seconde lame écraser la biopsie ou étaler la goutte de broyat a ?n d ? obtenir un frottis ?n et régulier Lorsque le frottis est sec e ?ectuer une coloration de Gram Lecture et interprétation de l ? examen direct Observer au microscope au grossissement X la présence éventuelle de bactéries ayant une morphologie correspondant à celle d ? un Helicobacter sp un bacille à Gram négatif de forme spiralée ou incurvée Faire une estimation quantitative du résultat négatif Rare quelques nombreux I Ensemencement des biopsies gastriques A partir du broyat ainsi obtenu déposer ou gouttes de suspension au centre de ou milieux de culture sélectifs gélose Pylo CNRCH ? et ou gélose pylori bioMérieux et réaliser un isolement en étoile sans toucher les bords de la bo? te pour éviter les contaminations Chaque milieu de culture est incubé sous atmosphère microaérobie dans une enceinte à C Si les milieux sont incubés en jarre la mise en atmosphère est réalisée à l ? aide d ? un Anoxomat Des sachets permettant la génération d ? une atmosphère microaérobie peuvent être également utilisés pas plus de gélose par sachet à condition de renouveler l ? atmosphère toutes les h- h Le reste du broyat est stocké au congélateur à - C en vue de la réalisation d ? une détection par PCR en temps réel CNR des Campylobacters et Helicobacters Bordeaux CCulture de Helicobacter pylori à