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Université Sidi Mohamed Bn Abdelah Faculté des sciences et techniques-Fès Proje

Université Sidi Mohamed Bn Abdelah Faculté des sciences et techniques-Fès Projet de fin d’étude Apport de la coloration automatisé dans l’hémogramme au Laboratoire Central d’Hématologie Hôpital Ibn Sina-Rabat Licence Sciences et Techniques Spécialité : Biologie et Santé Rédigé par : M’hachi Maryem Encadrée par :  Mr. MASRAR AZLARAB : Chef du laboratoire central d’hématologie du CHIS  Mr. TAHRI JOUTI MOHAMMED ALI : P .E.S à la FSTF Soutenu le 12 Juin, Salle B6 devant le jury :  Pr EL FARR&ICHA OMAR (FST Fès)  Pr MASRAR AZLARAB (CHIS Rabat)  Pr TAHRI JOUTI MOHAMMED ALI (FST Fès) 2 3 Remerciements Avant tous, mes souhaits les plus chères seront d’exprimer mes gratitudes au corps professoral et administratif de la Faculté des Sciences et Techniques de Fès, pour leur formation et encadrement durant toute la période de ma Licence Science et Technique. Je tiens à remercier au premier lieu , Pr AZLARAB MASRAR, chef de service du laboratoire central d’hématologie, Hôpital Ibn Sina-Rabat, de m’accepter comme stagiaire au sein de son équipe et de bien vouloir accorder le temps, malgré son programme chargé, à fin d’apporter des réponses à mes questions, tant professionnelles, que d’ordre plus général, et dont le savoir pratique m’a permis d’approfondir mes connaissances concernant le fonctionnement du laboratoire. Je remercie également mon encadrant pédagogique Pr TAHRI JOUTI MOHAMMED, qui, en tant que professeur, a bien voulu accepter de suivre mon travail, me diriger, à fin que je puisse mener mon projet à terme. Mes sincères remerciements et gratitudes vont au membre du Jury Pr EL FARRICHA OMAR, qui a bien voulu de m’honorer par sa présence. 4 Sommaire Introduction ……………………………………………………………..…..…5 Présentation du centre hospitalier Ibn Sina (CHIS) …………...………….6 Objectif du stage………...…………………………………...……................8 Partie I : la coloration des frottis sanguins………………………….…........9  Réalisation manuelle d’un frottis sanguin.........…..………….........10  la coloration du frottis sanguin…………………………………........12  Coloration de Wright.............................................................12  Coloration de Wright-Giemsa...............................................14  La coloration au May-Grunwald Giemsa..............................16 Partie II : les automates..........................................................................19  Matériels et méthodes utilisés.......................................................20  Les automates du laboratoire d’Hématologie.......................20  L’automate de coloration : Sysmex sp-1000i........................22  L’automate de coloration : Cell-DYN-SysTM..........................24  Lecture des frottis sanguins.................................................25  Valeurs physiologiques........................................................28  Résultats et discussions................................................................32  Résultats............................................................................................33  Discussion..........................................................................................37 Conclusion..............................................................................................43 Bibliographie...........................................................................................45 5 Introduction L’hématologie est la branche de la médecine qui traite le sang et ses pathologies. Elle s’intéresse à l’étude des cellules sanguines ou éléments figurés du sang qui ont un rôle dans l’oxygénation, l’immunité et la coagulation. Ces études sont réalisées par des techniques selon des règles et des normes de qualité. Ces règles normatives en hématologie ont été conçus dans le but de maintenir et d’améliorer la qualité globale des services offerts. L’objectif final consiste à promouvoir l’atteinte d’un degré optimal d’excellence dans le cadre des services rendus aux patients. Cette qualité de service nécessite une révolution technique pour faire face aux besoins de la santé publique en ce qui concerne l’hématologie, d’où l’automatisation des techniques d’analyse, dont fait partie la coloration des frottis sanguins qui constitue une technique majeur de la pratique hématologique. C’est en tenant compte de tous ces éléments et en conformité avec les pratiques généralement reconnues en hématologie que j’aborde et décrit la révolution qu’a reconnu la technique de la coloration des frottis sanguins. 6 Présentation du centre hospitalier Ibn Sina  La direction du CH Ibn Sina : La Direction du CHIS assure la coordination et la supervision des activités des dix établissements hospitaliers composant le centre et comprend : o Un Directeur Général o Un Secrétaire Général o 6 Divisions et 30 services administratifs  Organes :  Organes décisionnels : o conseil d’Administration; o Conseil de Gestion.  Organes de gestion : o Commissions Médicales Consultatives (CMC); o Comité Consultatif et de Suivi (CCS); o Commissions Paritaires; o Comités spécialisés. 7  Organigramme : 8 Objectif du stage Il va sans dire que le stage est une activité pédagogique qui nous permettra de développer de nombreuses habiletés nouvelles, non seulement du point de vue de technique spécifique, mais aussi dans la perspective de notre développement personnel, que ce soit au plan des comportements, des valeurs ou de la personnalité. Les stages visent principalement à sensibiliser les stagiaires à la pratique de la biologie dans un établissement de santé ou en un lieu agréé par la faculté des Sciences et techniques de Fès. Il a pour objectifs de permettre aux stagiaires :  D’appliquer les connaissances acquises à l’université.  D’appliquer dans des situations concrètes les lois, règlements et normes régissant la profession.  De développer une perspective multidisciplinaire. Le stage au sein d’un laboratoire d’analyse médicale spécialité hématologie permet de voir les différentes pratiques de cette discipline à partir de la phase prés analytique jusqu’à la validation du résultat. Par rapport au sujet qui m’a été désigné par le chef du laboratoire j’ai appris à utiliser la coloration automatisé et son apport dans l’hémogramme. Le stage permet de récolter le maximum d’information concernant les automates de la coloration leurs protocol de travail, les réactifs en question et les besoins des machines (maintenance, changement de réactifs …). Différents automates sont mises en place pour cette pratique autrefois réalisée manuellement. 9 Partie I : la coloration des frottis sanguins 10  Réalisation manuelle d’un frottis sanguin  Définitions Un frottis est un étalement de cellules sur une lame de verre observable au microscope (ex : frottis cervico-vaginal, frottis sanguin). Un frottis est une technique de préparation et non son analyse. Un frottis sanguin permet de réaliser un hémogramme.  Principe La réalisation d’un frottis sanguin consiste à obtenir, sur une lame de verre, une couche unicellulaire d’éléments figurés du sang répartis sur tout le frottis et fixés dans l’aspect le plus proche de l’état physiologique.  Matériel La réalisation d’un frottis sanguin nécessite : o Une lame de verre propre, dégraissée et sèche o Une lamelle d’étirement : lamelle épaisse, plus étroite que les lames, à bords lisses o Un tube contenant du sang capillaire ou veineux prélevé sur EDTA (acide éthylène diamine tétra acétique) sec o Un capillaire d’hématocrite ou une pipette o Une paire de gants pour risque biologique o Un conteneur pour DASRI (déchets d’activité de soins à risques infectieux)  Protocol Le protocol vise l’obtention d’un frottis sanguin uniforme permettant la visualisation des éléments figurés du sang, par des étapes et techniques bien précises : o Préparer le matériel nécessaire : lames dégraissées référencées, pastette, spatule, gants, sang, conteneur pour déchets contaminés. o Prélever le sang à l'aide de la pastette après l'avoir homogénéisé. Déposer une petite goutte à l'une des extrémités de la lame. o Positionner la spatule de façon à prendre la totalité de la goutte. La laisser se répartir de façon homogène le long du biseau. o Appliquer un mouvement de translation horizontale en maintenant la spatule d’un angle de 45° environ sans appuyer tout au long de la lame. o Sécher par agitation pour fixer temporairement les cellules. Éliminer les déchets contaminés. 11  Etalements (laboratoire central d’hématologie, Hôpital Ibn Sina-Rabat) o Critères d’un bon frottis  De bonne taille (½ à ¾ de la lame)  De bonne densité  Goutte étalée en entier  Distant des bords de la lame donc accessible en tout point à l’observation microscopique o Causes d'erreurs  Lames mal dégraissées génère des trous.  Lames sales, poussiéreuses génère des traînées.  Irrégularité du mouvement donne des stries  Angle trop aigu abouti à un frottis trop fin et/ou trop long avec franges.  Angle trop obtus : le frottis est trop épais et/ou trop court  Goutte non étalée en entier donne un frottis non représentatif du sang 12  Arrêt du mouvement avant épuisement du sang aboutit à une barre épaisse en bout de frottis  Coloration d’un frottis sanguin Les colorants utilisés doivent être de fabrication récente, conservés en récipient étanche, à l’abri de l’air, de la lumière et de la chaleur. Ils seront éventuellement filtrés avant emploi. L’utilisation de l’eau neutralisée ou tamponnée est préférable. Les frottis sanguins sont habituellement colorés par les colorations de Wright et May- Grunwald Giemsa ou même Wright-Giemsa.  Coloration de Wright : o Principe Très répondu aux Etat Unis, la coloration de Wright permet la réalisation de formule sanguine et médullaire. Le colorant de Wright est un mélange de Bleu de méthylène, d’éosine et d’azur de méthylène. Il fixe le frottis par son alcool méthylique et comme tous les colorants neutres en solution alcoolique, il ne libère son activité colorant qu’après additions d’eau tamponnée.(IVD, Dispositif médical de diagnostique in vitro) o Produits nécessaires à la coloration Colorant de Wright en solution : modifié à 0 .3% p/v, tamponnée à un ph=6.8 dans du méthanol. Tampon en solution pour Wight : un mélange de phosphate et de sodium et de phosphate de potassium 0.0083M, pH=7.2 o Mode opératoire Techniques par recouvrement, temps de réalisation : 9min  Couvrir le frottis avec 1mL de colorant de Wright en solution pendant 2min  Egoutter l’excédent sur papier filtre  Couvrir le frottis avec le colorant uploads/Sante/apport-de-la-coloration-automa-m-x27-hachi-maryem-756.pdf