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Unité de recherche DOCUMENT INFORMATIF HS-DI-03 GUIDE DES BONNES PRATIQUES EN L

Unité de recherche DOCUMENT INFORMATIF HS-DI-03 GUIDE DES BONNES PRATIQUES EN LABORATOIRE DE CONFINEMENT L2 Page 1 / 10 Version 4 REDACTION Signature VERIFICATION Signature APPROBATION Signature Date d’application Leslie AUDIGANE Aurore GIRARDEAU Amandine CAILLAUD Angélique ERRAUD Stéphanie BONNAUD SOMMAIRE 1- INTRODUCTION ..................................................................................................................... 2 2- CONSIGNES DE SECURITE GENERALES .................................................................................... 2 3- ENTREE DANS LE LABORATOIRE ............................................................................................. 3 4- TRAVAIL DANS LA SALLE DE CULTURE L2 ................................................................................ 3 4.1- UTILISATION D’UN PSM II ....................................................................................................... 3 4.2- CAS PARTICULIER DES OGM ................................................................................................... 5 5- GESTION DES DECHETS .......................................................................................................... 5 5.1. DECHETS BIOLOGIQUES SOLIDES ........................................................................................... 5 5.2. DECHETS BIOLOGIQUES LIQUIDES ......................................................................................... 6 5.3. CAS PARTICULIER DES OGM ................................................................................................... 6 6- NETTOYAGE ET DESINFECTION .............................................................................................. 7 6.1 - DESINFECTION DES SURFACES AVEC ANIOXY-SPRAY WS ................................................... 7 6.2- DESINFECTION DE LIQUIDE AVEC REA-STABIL .................................................................... 8 6.2- NETTOYAGE REGULIER ........................................................................................................ 8 7- SORTIE DU LABORATOIRE ...................................................................................................... 8 8- PROCEDURES D’URGENCE ..................................................................................................... 9 9- INTERVENTION SUR LE MATERIEL DES LABORATOIRES DE CONFINEMENT L2 ......................... 9 Unité de recherche DOCUMENT INFORMATIF HS-DI-03 GUIDE DES BONNES PRATIQUES EN LABORATOIRE DE CONFINEMENT L2 Page 2 / 10 Version 4 1- INTRODUCTION Les laboratoires de confinement L2 sont à considérer comme des outils et non comme des pièces de travail classiques. Leur accès est strictement réservé aux seules personnes autorisées à y pénétrer et formées spécifiquement pour y travailler. Ce guide de bonnes pratiques en L2 a pour objectif d’harmoniser les pratiques d’utilisation de ces structures de confinement et de leurs équipements. Il fournit une référence technique aux personnels qui travaillent ou envisagent de travailler en laboratoire de niveau de confinement L2. La variété d’organisation des laboratoires, de leurs équipements et des applications scientifiques qui y sont développées est telle qu’elle rend impossible toute harmonisation stricte, au sein d’un document unique et exhaustif. Ce guide est donc un document type qui doit être adapté et/ou complété pour tenir compte de la situation locale par les utilisateurs en concertation avec la cellule hygiène et sécurité. 2- CONSIGNES DE SECURITE GENERALES Il est interdit de consommer ou de conserver des aliments ou des boissons dans les sas des laboratoires L2 et dans les laboratoires L2. Il est interdit de fumer, se maquiller, manipuler des lentilles de contact et se ronger les ongles. Il est interdit d’entreposer des vêtements civils ou d’autres blouses que les blouses L2 dans le sas. Le nombre de personnes travaillant en même temps dans un laboratoire L2 (hors 122) doit être limité à 4. Les entrées et sorties dans les laboratoires L2 doivent être réduites au maximum. Un téléphone est disponible dans tous les laboratoires L2 pour communiquer avec l’extérieur du L2. Seuls les agents biologiques de groupe 1 et 2 peuvent être manipulés dans les laboratoires de confinement L2 (voir Tableau 1). Tableau 1. Groupe de risques des agents biologiques : les agents biologiques autorisés à être manipulés en laboratoire de confinement L2 sont entourés en bleu, les autres sont interdits. Unité de recherche DOCUMENT INFORMATIF HS-DI-03 GUIDE DES BONNES PRATIQUES EN LABORATOIRE DE CONFINEMENT L2 Page 3 / 10 Version 4 Les OGM regroupent tout organisme dont le matériel génétique a été modifié autrement que par multiplication ou recombinaison naturelles. Leur production ou utilisation nécessite d’en avoir fait la déclaration auprès du HCB1. Chaque manipulation d’OGM est classée en confinement OGM C1 ou OGM C2. Leur utilisation nécessite des précautions supplémentaires détaillées dans ce document. 3- ENTREE DANS LE LABORATOIRE Seules les personnes formées et informées de la nature des recherches sont autorisées à entrer dans le laboratoire L2. La liste du personnel autorisé est affichée à l'extérieur du laboratoire, elle est mise à jour par le chargé de la qualité à la demande du référent de laboratoire. Avant d’ouvrir une porte du sas (accès couloir ou accès laboratoire), il faut systématiquement vérifier que les autres portes soient bien fermées. Mettre des sur-chaussures Se laver les mains Mettre une blouse réservée au L2 (logo de l’institut entouré de rouge) Mettre des gants Si du matériel doit être entré dans le laboratoire, désinfecter l’extérieur Entrer dans le laboratoire L2 Règles spécifiques à l’utilisation de vecteurs viraux : mettre, en plus sur la blouse L2, une sur-blouse à fermeture dorsale et une double paire de gants. Changer de gants toutes les 20-30 minutes. 4- TRAVAIL DANS LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT L2 Nettoyer et désinfecter les surfaces de travail (PSM II, paillasse) avant et après manipulation. Utiliser du matériel jetable uniquement. Des incubateurs, réfrigérateurs et congélateurs sont disponibles dans les laboratoires L2 et sont dédiés au stockage et à la conservation des milieux de cultures, des cultures et des échantillons. 4.1- UTILISATION D’UN PSM II Liste des opérations à réaliser impérativement sous PSM II : − Maintenance et traitements des lignées cellulaires nécessitant un confinement L2 : o Congélation o Décongélation o Repiquage o Préparation de traitements 1 Haut Conseil des Biotechnologies (Ministère de l’enseignement supérieur, de la recherche et de l’innovation) Unité de recherche DOCUMENT INFORMATIF HS-DI-03 GUIDE DES BONNES PRATIQUES EN LABORATOIRE DE CONFINEMENT L2 Page 4 / 10 Version 4 o Changement de milieu et traitements o Manipulation OGM : Transduction, Infection, Transfection… − Traitement de cellules à la mitomycine (Attention : la mitomycine est un agent classé mutagène (cat. 1A) cancérigène (cat. 1A) et reprotoxique (cat. 2)) − Réception et manipulation de prélèvements humains Note : Préparation des échantillons pour des manipulations hors PSM II : rester sous PSM II au maximum, transférer la manip sous Sorbonne si utilisation de produits chimiques dangereux. Traiter tous les déchets conformément au niveau de confinement des échantillons. 1 seul utilisateur par PSM II Mettre la ventilation du PSM en fonctionnement 15 minutes avant la manipulation Régler la hauteur du siège Nettoyer et désinfecter le plan de travail et la vitre du PSM II Désinfecter le matériel nécessaire à la manipulation Positionner le matériel sur le plan de travail du PSM II en n'obstruant pas les bandeaux d'aspiration avant et arrière Eviter de surcharger la zone de travail et les bandeaux de reprise d’air des PSM II, afin de ne pas perturber les flux. Ne pas utiliser plus de 40% de la zone de travail Se positionner de façon à ne pas gêner l'aspiration par la veine de garde (bandeau d'air aspiré à l'avant du plan de travail qui crée une barrière immatérielle et protège le manipulateur) Utiliser les repose-poignets si ils sont présents Ne pas passer la main au-dessus des tubes, boîtes de cônes ou contenants de culture cellulaire ouverts et limiter l'ouverture de ces derniers au maximum. Mettre en œuvre toutes les pratiques opératoires évitant la formation de gouttelettes et aérosols : - Éviter les éjections sous pression - Éviter les pipetages rapides - Ouvrir les tubes après centrifugation avec délicatesse - Réaliser les remises en suspension avec précaution : aspirations et refoulements doux et écoulement des liquides contre les parois du récipient. A la fin de la manipulation : Laisser le PSM en fonctionnement pendant 5 à 10 minutes pour purger l'intérieur de tout aérosol contaminant Ranger le plan de travail Nettoyer et désinfecter le plan de travail Laisser en fonctionnement 15 minutes pour éliminer les aérosols générés par le nettoyage Unité de recherche DOCUMENT INFORMATIF HS-DI-03 GUIDE DES BONNES PRATIQUES EN LABORATOIRE DE CONFINEMENT L2 Page 5 / 10 Version 4 4.2- CAS PARTICULIER DES OGM Les PSM II utilisés pour la manipulation des OGM doivent impérativement avoir été certifiés par le LNE (mention NF sur le PSM II). La manipulation d’OGM dans les PSM II doit être clairement mentionnée. Aucun OGM ne doit être manipulé sous les PSM II non identifié OGM. Selon les cas, port : o d’une blouse spécifique OGM et d’une paire de gants spécifiques qui ne serviront que pour les manipulations OGM o ET, d’une sur-blouse jetable et d’une double paire de gants pour la manipulation de vecteurs viraux A la fin de la manipulation ou avant de commencer une manipulation sans OGM : o Changer les gants et la blouse, se laver les mains. o Dans le cas de manipulations de vecteurs viraux, retirer la première paire de gant, retirer la sur-blouse et la blouse spécifique avant de retirer la dernière paire de gants. Se laver les mains. Note : Ces pratiques de travail dans le cadre de manipulation d’OGM pourront être modifiées en fonction du type de vecteurs, de cellules hôtes ou de gènes modifiés dans les projets scientifiques. 5- GESTION DES DECHETS 5.1. DECHETS BIOLOGIQUES SOLIDES Tous les déchets biologiques solides (matériel jetable contaminé, tubes, plaques de cultures…) sont évacués dans les poubelles jaunes de Déchets d’Activité de Soins à Risques Infectieux (DASRI). Identifier les poubelles DASRI à l’ouverture et à la fermeture (Noter sur l’emballage : le nom de l’unité, le N° de pièce, la date et vos initiales). Ne pas « bourrer » les poubelles DASRI : risques de perforation. Bien refermer le sachet plastique avec le lien. Evacuer les poubelles dès qu’elles sont pleines uploads/Science et Technologie/ hs-di-03-guide-des-bonnes-pratiques-en-laboratoire-de-confinement-l2-v4-non-signe.pdf