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Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – 60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr Page 1 sur 3  Ensemencement : En profondeur  Incubation : 48 à 72 h à 32,5 ± 2,5 °C  Ensemencement : En surface  Incubation : 24 h à 48 h à 30-35 °C  Reconstitution : 61,4 g/L  Stérilisation : 15 min à 121 °C FICHE TECHNIQUE GELOSE DE SABOURAUD DEXTROSE (SDA) DENOMBREMENT DES LEVURES ET MOISISSURES 1 DOMAINE D’UTILISATION La gélose de Sabouraud Dextrose (SDA) permet la culture, l’isolement et le dénombrement des levures et des moisissures pour le contrôle de stérilité des produits pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires. 2 PREPARATION Préparation du milieu déshydraté :  Mettre en suspension 61,4 g de milieu déshydraté (BK025) dans 1 litre d’eau distillée ou déminéralisée.  Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution.  Répartir en tubes ou en flacons.  Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes. Préparation du milieu prêt-à-liquéfier ou du milieu préparé en flacons :  Faire fondre le milieu ainsi préparé ou prêt-à-liquéfier (BM053) pendant le minimum de temps nécessaire à sa reliquéfaction totale.  Refroidir et maintenir le milieu à 44-47 °C.  Pour un ensemencement en surface, couler en boîtes de Petri stériles et laisser solidifier sur une surface froide.  Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert. Notes :  Tout chauffage excessif du milieu conduit à la dénaturation de l’agar en pH acide et par conséquent à l’obtention d’un milieu trop mou.  Si nécessaire, ajouter stérilement 1 mL de supplément sélectif reconstitué : Gentamicine 25 mg (se référer à la fiche technique du BS009) ou/et Chloramphénicol 50 mg (se référer à la fiche technique du BS021) à 100 mL de milieu. Bien homogénéiser l'ensemble. 3 MODE D’EMPLOI - Microbiologie cosmétique (NF EN ISO 11930) :  Transférer 1 mL de la suspension dans une boîte de Petri stérile.  Couler environ 15 mL de milieu.  Homogénéiser parfaitement et laisser solidifier sur une surface froide.  Incuber à 32,5 ± 2,5 °C de 48 heures à 72 heures. Note : Pour la préparation des souches de référence, ensemencer la suspension à la surface du milieu pré-coulé (BM173 ou BM174) ou du milieu préparé en boîtes et incuber à 32,5 ± 2,5 °C pendant 18 heures à 24 heures. - Chapitres harmonisés des Pharmacopées :  Transférer l’inoculum à la surface du milieu pré-coulé (BM173 ou BM174) ou du milieu préparé en boîtes.  Etaler l’inoculum en surface à l’aide d’un étaleur stérile.  Incuber à 30-35 °C pendant 24 heures à 48 heures. BK025HA BM05308 BM17308 BM17408 Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – 60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr Page 2 sur 3 Notes :  Pour la préparation des souches de référence, incuber à 20-25 °C pendant 2 jours à 3 jours selon la souche.  Pour d’autres utilisations, se reporter au référentiel en vigueur. 4 LECTURE Après incubation, observer la croissance bactérienne. Dénombrer les boîtes contenant un nombre de colonies inférieur à 150. Faire les observations microscopiques et les tests spécifiques appropriés pour confirmer les résultats. 5 FORMULE-TYPE Cette formule-type peut être ajustée de façon à obtenir des performances optimales. Pour 1 litre de milieu : - Dextrose * .................................................................................................................. 40,0 g - Digestat pancréatique de tissus animaux .................................................................. 5,0 g - Digestat pancréatique de caséine .............................................................................. 5,0 g - Gélose ....................................................................................................................... 15,0 g pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25 °C : 5,6 ± 0,2. * Le milieu déshydraté contient 36,4 g de dextrose anhydre correspondant à 40,0 g de dextrose monohydraté. 6 CONTROLE QUALITE Milieu déshydraté : poudre blanc-crème, fluide et homogène. Milieu préparé : gélose ambrée claire. Réponse culturale typique après 72 heures d’incubation à 20-25 °C (NF EN ISO 16212 ; XP CEN ISO/TS 11133) : Microorganismes Croissance 1 Candida albicans WDCM 00054 2 Aspergillus brasiliensis WDCM 00053 Saccharomyces cerevisiae WDCM 00058 PR  50% PR  50% PR  50% 1 Et après 24 heures d‘incubation à 30-35 °C en surface (NF EN ISO 18416) 2 Et après 72 heures d‘incubation à 20-25 °C en profondeur (NF EN ISO 16212) 7 CONSERVATION Milieu déshydraté : 2-30°C. Milieu de base préparé en flacons ou en tubes : 6 mois à 2-25 °C (à titre indicatif). Milieu complet préparé en boîtes : 1 mois à 2-8 °C (à titre indicatif). Milieu prêt-à-liquéfier en flacons : 2-25 °C, à l’abri de la lumière. Milieu pré-coulé en boîtes de Petri : 2-8 °C, à l’abri de la lumière. Les dates de péremption sont mentionnées sur les étiquettes. 8 PRESENTATION Milieu pré-coulé en boîtes de Petri (Ø 90 mm) : 20 boîtes .............................................................................................................................................................. BM17308 120 boîtes ............................................................................................................................................................ BM17408 Milieu prêt-à-liquéfier : 10 flacons de 200 mL ......................................................................................................................................... BM05308 Milieu déshydraté : Flacon de 500 g ................................................................................................................................................... BK025HA Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – 60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr Page 3 sur 3 9 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES SABOURAUD, R.. 1900. Les teignes, Masson et Cie, Paris, 553. AJELLO, L.. 1957. Cultural methods for human pathogenic Fungi. Journal of Chronic Diseases, 5 : 545. PAGANO, J., LEVIN, J.D., and TREJO, W.. 1957/1958. Diagnostic medium for differentiation of species of Candida. Antibiotics Annual, 5 : 137-143. XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture. NF EN ISO 18416 (T 75-607). Septembre 2009. Cosmétiques. Microbiologie. Détection de Candida albicans. NF EN ISO 16212 (T 75-608). Aout 2011. Cosmétiques. Microbiologie. Dénombrement des levures et des moisissures. NF EN ISO 11930 (T 75-600). Juin 2012. Cosmétiques. Microbiologie. Evaluation de la protection antimicrobienne d’un produit cosmétique. Pharmacopée Européenne 2.6.13. Contrôle microbiologique des produits non stériles : Recherche de microorganismes spécifiés. Solution et milieux de culture recommandés. United States Pharmacopeia. Microbiological Tests / Microbial Limit Tests. Buffer Solution and Media. Microbiological Tests / Microbiological Examination. Recommended Solutions and Culture Media. 10 AUTRES INFORMATIONS Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document et sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis. Code document : BM053_173_174/FR/2013-03 : 2. Date création : 03-2013 Date de révision : 12-2013 Motif de révision : Révision générale (§ 3 : Mode d’emploi ; § 5 : Formule-type ; § 8 : Présentation ; § 9 : Références bibliographiques). uploads/Geographie/ sda-milieu-culture.pdf