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1ère STL Fiche technique n°25 LE TEST ONPG 1. Intérêt Ce test est réalisé lors

1ère STL Fiche technique n°25 LE TEST ONPG 1. Intérêt Ce test est réalisé lors de l’identification de très nombreuses bactéries (Gram + et Gram -). La -galactosidase est une enzyme qui intervient dans le métabolisme du lactose. L’utilisation du lactose par la bactérie requiert deux enzymes :  la lactose perméase qui permet au lactose de pénétrer dans la bactérie  la -galactosidase qui catalyse l’hydrolyse du lactose en glucose et galactose. La recherche de la -galactosidase ne présente d’intérêt que pour les bactéries lactose -. En effet, toutes les bactéries lactose + sont -galactosidase +. La recherche de l’enzyme est donc inutile. 2. Principe La -galactosidase est une enzyme inductible : elle n’est synthétisée par la bactérie que lorsque celle–ci est en présence de son substrat.  La recherche de la -galactosidase ne peut donc se faire que sur un milieu contenant du lactose (exemple : le milieu Kligler Hajna). On utilise un substrat synthétique : l’ortho-nitro-phényl-galactoside (= ONPG) incolore, de structure proche du lactose et capable de pénétrer dans la bactérie sans perméase.  Si la bactérie possède la -galactosidase, on obtient du galactose et de l’ortho- nitro-phénol (= ONP) de couleur jaune. La réaction est la suivante : ONPG -gal ONP + galactose 3. Ensemencement ATTENTION : Ce test doit être effectué à partir d’une souche lactose - cultivée dans un milieu contenant du lactose.  Faire une suspension dense en eau stérile (tube à hémolyse)  Déposer un ½ disque d’ONPG  Placer au bain-marie à 37°C  Lire après 30 minutes 4. Lecture Observation Interprétation Conclusion Coloration jaune La bactérie a hydrolysée l’ONPG en ONP (produit coloré jaune) La bactérie possède la -galactosidase elle est dite ONPG + Incolore Il n’y a pas d’ONP dans le milieu, la bactérie n’a pas hydrolysé l’ONPG La bactérie ne possède pas la -galactosidase elle est dite ONPG - substrat incolore produit jaune uploads/Geographie/ fiche-technique-onpg.pdf