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République Algérienne Démocratique et Populaire Ministère de l’enseignement Sup

République Algérienne Démocratique et Populaire Ministère de l’enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique Université Djilali Bounaama de Khemis Miliana Faculté des sciences de la nature et de la vie et des sciences de la terre Département des sciences biologique Mémoire de fin d’étude En vie de l’obtention d’un diplôme de Master en Analyses Biologiques et Biochimiques Thème Evaluation de la capacité des souches de Staphylococcus spp à former des biofilms dans l’industrie laitière Soutenu le 19/06/2017 Présentée par Bentiba Khadidja Bentiba Lamya Année universitaire : 2016 /2017 Devant le jury Mr Badache. H Président MCB UDB Khemis Miliana Mr Amrouche. Z Examinateur MAA UDB Khemis Miliana Mr Ait ouazzou. A Examinateur MCA UDB Khemis Miliana Mme Didouh. N Promotrice MCB UDB Khemis Miliana Remerciements Remerciements Remerciements Remerciements Avant toute chose, nous remercions(Dieu), le tout puissant, pour la santé, la patience et le courage qu’il nous à donner, pour la réalisation de ce modeste travail. Tout d’abord, Nous remerciements les plus vifs s’adressent à M M M Mme me me me Didouh N. Didouh N. Didouh N. Didouh N. pour son encadrement. Nous remercions Mr Badache Mr Badache Mr Badache Mr Badache maitre de conférence classe B d’avoir accepté de présider le jury de ce travail. Nous remercions également très sincèrement Mr Amrouche maitre Mr Amrouche maitre Mr Amrouche maitre Mr Amrouche maitre assistant classe A assistant classe A assistant classe A assistant classe A d’avoir accepté de présider le jury de ce travail. Nous remercions Mr Ait ouazzou. Mr Ait ouazzou. Mr Ait ouazzou. Mr Ait ouazzou. maitre de conférence classe A d d d d’avoir accepté d’examiner ce modeste travail. Nous remercions également M M M Mme me me me Nadjiba, Aicha Nadjiba, Aicha Nadjiba, Aicha Nadjiba, Aicha et M M M Mme me me me Affafe Affafe Affafe Affafe techniciennes aux laboratoires de microbiologie pour la réalisation de travail. Nous remercions également l’ensemble des personnelle du laboratoire d’analyses médicales de Dr Zibouche Dr Zibouche Dr Zibouche Dr Zibouche en particulier Asma et Yassine pour leur disponibilité et leur aide dans la réalisation de différentes manipulation au service de microbiologie. Nous remercions toutes personnes ayant participé de prés ou de loin d’avoir à la réalisation de ce modeste travail. Nous remercions énormément tous nos collègues de la spécialité analyses biologiques et biochimiques Khadidja et lamya Khadidja et lamya Khadidja et lamya Khadidja et lamya Dédicace Dédicace Dédicace Dédicace Je remercie tout d'abord Dieu de m’avoir accordé des connaissances de la science et de m’avoir aidé à réaliser ce travail. Avant tous, je dédie ce travail : A tous ceux qui me sont proches et chers, mes parents, qu’ils trouvent ici gratitude pour leur soutien, leur confiance en moi, leur encouragements. A mes sœurs : Fatima, Djamila, Aicha, Nacera et Amina. A mes frères : Moustapha et Mohamed que dieu les émisses. A tous ma famille : Oncles, Tantes, Cousins et cousines. A tous mes filles étrangères de l’université de Khemis Miliana. A tout mes amis surtouts : Hanane, Kheira, Nawel et Zahra Mon cher binôme : Lamya Sans oublier mes collègues les étudiants de 2éme Année Master Analyses Biologiques et Biochimiques. Promotion 2016-2017 Khadidja Khadidja Khadidja Khadidja Dédicace Dédicace Dédicace Dédicace Je remercie tout d'abord Dieu de m’avoir accordé des connaissances de la science et de m’avoir aidé à réaliser ce travail. A la bougie de ma vie, la fleur de mes jours, A ma chère maman qui n’a jamais cessé de ménager ses efforts pour que j’atteigne ce niveau. Ses sacrifices et privations ne l’ont pas empêché d’accomplir son devoir de mère soucieuse de l’’avenir de ses enfants. A mon père qui a sacrifie sa vie pour notre instruction. A mes chers frères : Mohammed, Ahmad et Abd el-wahab. A mes chères sœurs :Fatima, Amina, Khalida , Hizia et Affaf pour leurs disponibilités, leurs encouragements. A mes oncles et mes tantes , Cousins et cousines. A tout mes amis :hanane ,samira , khadidja, Zahra, fatima ,Wahiba et Hajdira A toute ma grande famille : BENTAIBA Mon cher binôme et mon cousines : Khadîdja. A tous mes camarades de promotion de master II d’analyses biologiques et biochimiques. lamya lamya lamya lamya Sommaire Liste d’abréviations Liste des figures Liste des tableaux Introduction 01 Partie I : Synthèse bibliographique 03 I : Biofilm du Staphylococcus 03 II-Définition 03 III- La formation de biofilm par Staphylococcus spp dans l'industrie alimentaire 04 IV- Les compositions de biofilms 05 V- Les étapes de formation des biofilms. 06 V.1. Film de conditionnement 06 V.2. L’adhérence réversible 06 V.3. L’adhérence irréversible 07 V.4. Le développement précoce du biofilm 07 V.5. La maturation du biofilm 07 V.6. Le détachement de bactéries 07 VI. Facteurs favorisant la formation d’un biofilm 09 VI-1. Caractéristiques de la surface 09 VI-2. Caractéristiques du milieu 10 VI-3. Propriétés des cellules 11 VII- Les effets bénéfiques et néfastes de biofilms 12 VII- Problèmes liés aux biofilms dans les industries laitières 13 IX- Prévention et élimination des biofilms 15 Partie II : Partie Expérimentale I. Matériels et Méthodes I. Lieu d’étude 17 II.L’origine des souches 17 III. Matériel 17 IIII. Revification et vérification de la pureté des souches 18 V. Evaluation de la formation de biofilm in vitro 18 V.1 .La méthode du Rouge Congo Agar 18 V.2. La méthode en tube (TM) 19 V.3.La technique MATH (Microbial Adhesion To Hydrocarbon 19 V.4. Evaluation de la capacité des souches à formé le biofilm 20 V.4.1. Nettoyage des lames d’acier inoxydable 21 V.4.2.Essai d’obtention d’un biofilm expérimental 22 II : Résultats et Discussions I.- Caractères phénotypiques des Staphylococcus spp isolés 23 II- Evaluation de la formation de biofilm 23 II-1- Technique Rouge Congo Agar 24 II-2- Technique TM 26 II.3- Technique MATH 29 II.4- .Evaluation de formation de biofilm sur l’acier inoxydable 31 Conclusion 34 Références bibliographiques Annexe Liste des figures et des tableaux Figure n°01: Composition du biofilm 05 Figure n°02 : Schéma présentant les étapes du développement du biofilm 08 Figure n°03 : Représentation schématique du test de MATH permettant la mesure d’affinité des Staphylococcus spp à l’’héxadécane. 20 Figure n°04 : aspect macroscopique des colonies de Staphylococcus sur Gélose Chapman 23 Figure n°05: Production de Slime chez les souches Staphylococcus spp isolées sur milieu Rouge Congo Agar 24 Figure n°06: Répartition des souches Staphylocoques spp isolées d’industrie laitière en fonction de production de Slime bactérien 25 Figure n°07 : Evaluation de la production de biofilm par la méthode TM 27 Figure n°08 : Répartition des souches Staphylocoques spp isolées d’industrie laitière en fonction de la production de biofilm 27 Figure n°09 : Pourcentage d’affinité des souches Staphylococcus spp al’héxadecane 29 Figure n°10 :L’adhésion des souches Staphylococcus spp sur l’acier inoxydable Tableau n°01 : La comparaison des résultats de la technique RCA et la méthode TM 31 28 . Résumé : La formation de biofilm pose des problèmes dans beaucoup de branches de l'industrie alimentaire. En industrie laitière, les biofilms de Staphylococcus se forment habituellement sur les surfaces qui sont en contact avec des fluides, et peuvent être une source de contamination bactérienne et la transmission de maladies. Dans ce travail, on a évalué la capacité de 19 souches de Staphylococcus spp isolées d’industrie laitière à former un biofilm par différents méthodes : méthode RCA, méthode TM, méthode MATH et la capacité de formation d’un biofilm sur l’acier inoxydable. La production de Slime sur milieu rouge Congo a révélé que 04 souches sont productrices de Slime (21.05%), 08 souches sont intermédiaire (42.10%) et 07 souches non productrice du Slime (36.84%).Selon la technique TM, 5 souches ont été fortement formatrices du biofilm (26,31%), 09 souches étaient modérément (47,36%) et 05 souches ont été non formatrices du biofilm (26,31%). Pour la technique MATH, 09 souches sont hydrophobes, 08 moyennement hydrophobes et 02 souches sont hydrophiles. L’étude de la formation de biofilm sur l’acier inoxydable montre que le nombre maximum des cellules adhérentes a été de l'ordre de 5,80x106 UFC/cm2 et un nombre minimum de 1,2x105 UFC/cm2. La comparaison des résultats de la technique RCA, la technique TM, MATH et la technique d’adhésion sur acier inoxydable permet d’observer qu’il y a une relation entre la production de slime, l’hydrophobicité et la formation de biofilm soit sur le verre ou sur l’acier inoxydable. Mots clés : Staphylococcus spp, biofilm, hydrophobicité, Slime. Abstract: The formation of biofilm is problimatic in many branches of the food industry. In the dairy industry, biofilms of Staphylococcus are usually formed on the surfaces which are in contact with fluids, and can be a source of bacterial contamination and the transmission of diseases. In this work, we assessed the ability of 19 strains of Staphylococcus spp isolated from dairy industry to form a biofilm by different methods: RCA method, method TM, MATH method and the ability to form biofilm on the Stainless Steel surface. The production of slime on medium Congo Red Agar revealed that 04 strains are producing Slime (21.05%), 08 strains are intermediate (42.10%) and 07 strains, non producer of the Slime (36.84%).According to the method TM, 5 strains have uploads/Geographie/ biofilm-memoir-complet.pdf