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Materiels et methodes hcv ? Matériels Appareillage -Agitateur magnétique -Bain marie agitateur - Centrifugeuse réfrigérée -Congélateur - C et - C -Etuve -Néphélemètre -PH mètre -Pipette électronique -Spectrophotomètre -Vortex Les équipements -Balance -Chr

? Matériels Appareillage -Agitateur magnétique -Bain marie agitateur - Centrifugeuse réfrigérée -Congélateur - C et - C -Etuve -Néphélemètre -PH mètre -Pipette électronique -Spectrophotomètre -Vortex Les équipements -Balance -Chronomètre -Cupules -Embouts -Eppendorfs - Gants à usage unique -Glace pilée -Micropipettes réglables de à ?l - Portoirs -Tubes coniques -Tubes en verre et en plastique de ml La Verrerie -Bécher -Eprouvettes graduées de ml à ml -Erlenmeyer - Pipettes pasteur -Pissette -Tube à essai -Tube à visse ? Méthodes - Recrutement des patients Les patients ont été recrutés au niveau du service de gastro-entérologie de l ? hôpital Mohamed Lamine DEBAGHINE et de l ? hôpital Mustapha BACHA service de néphrologie de l ? hôpital Parnet d ? hémodialyse de Rouiba ainsi que le centre de transfusion sanguine de Ain- Taya ainsi qu ? à l ? institut pasteur CAprès trois mois de recrutement échantillons sanguins de patients infectés par le virus de l ? hépatite C avec en parallèle trente individus sains servant de temoin ont pu être récolté Tous les participants de l ? étude ont signé un consentement après avoir été informé du but de la recherche et du devenir des prélèvements - Collecte du sang et séparation des plasmas et sérums Le sang est récolté dans un tube Falcon et dans un tube sec Les tubes Falcon contiennent de l ? anticoagulant EDTA qui est un chélateur d ? ions Ca a ?n d ? empêcher l ? inactivation spontanée du complément pour la technique du CH Les tubes sont maintenus à C jusqu ? à l ? acheminement vers le laboratoire Les tubes EDTA sont centrifugé à rpm pendant minutes à C le plasma obtenu est aliquoté dans des Eppendorfs à l ? aide d ? une micropipette et stocké à - C a ?n de conserver l ? activité du complément Le sérum est récupéré à partir des tubes secs après décantations puis centrifugation à Rpm min pendant min à C et conservé à - C - Dosage du complexe hémolytique CH Principe Le test CH est un dosage hémolytique fonctionnel qui consiste à utiliser des érythrocytes de mouton sensibilisés par des anticorps de lapin anti- érythrocytes hémolysine Le complexe immun formé active la voie classique du complément On dé ?nit alors le CH comme la quantité de sérum donnant d ? hémolyse et on l ? exprime en pourcentage d ? un témoin constitué d ? un pool de sérums normaux qui est le plasma humain normal PHN Mode opératoire A-Préparation des globules rouges sensibilisés - Des globules rouges de mouton GRM sont successivement lavés avec un tampon de lavage GVB-EDTA et centrifugé à Rpm min minutes à C -Une suspension à de ces GRM dans le même tampon est ensuite préparée v v -La concentration des cellules est équilibrée à ml en ajustant la concentration de l de ces derniers dans ml d ? eau distillé sur une longueur d ? onde de nm pour une densité optique de -La suspension est sensibilisé